Pertukaran Besar Amerika adalah peristiwa zoogeografi penting sekitar tiga juta tahun yang lalu. Fauna darat dan air tawar bermigrasi antara Amerika Utara dan Amerika Selatan.

Migrasi terjadi selama Pliosen, 3,6-2,6 juta tahun yang lalu (mya). Tanah Genting vulkanik Panama muncul dari dasar laut dan menjembatani kedua benua.

Jembatan darat di tempat yang sekarang menjadi Panama menggabungkan ekozon Neotropik (kira-kira Amerika Selatan) dan Nearktik (kira-kira Amerika Utara) untuk membentuk benua Amerika.

Pertukaran terlihat dari stratigrafi dan alam. Efeknya yang paling dramatis adalah pada distribusi mamalia, tetapi burung-burung yang terbang lemah atau tidak bisa terbang, reptilia, amfibi, artropoda, dan bahkan ikan air tawar juga bermigrasi.

Perbedaan fauna di Amerika Utara dan Selatan telah diketahui sejak lama. Baik Humboldt maupun Darwin membahasnya. Pertukaran sebagai sebuah konsep pertama kali sepenuhnya ditata pada tahun 1876 oleh "bapak biogeografi", Alfred Russel Wallace. Wallace telah menghabiskan tahun 1848-1852 untuk menjelajahi dan mengumpulkan spesimen di Lembah Amazon. Orang lain yang memberikan kontribusi signifikan untuk memahami peristiwa tersebut pada abad berikutnya termasuk Florentino Ameghino dan George Gaylord Simpson.

Pertukaran serupa terjadi lebih awal di Cainozoic, ketika bekas benua Gondwana India dan Afrika melakukan kontak dengan Eurasia, masing-masing sekitar 50 dan 30 mya.