Pada tahun 340 SM, Philip mengumpulkan pasukan Makedonia yang besar dan menginvasi Thrace. Dia meninggalkan Aleksander yang berusia 16 tahun dengan kekuasaan untuk memerintah Makedonia saat dia tidak ada sebagai bupati. Tetapi ketika tentara Makedonia maju jauh ke Thrace, suku Thracian Maedi yang berbatasan dengan Makedonia timur laut memberontak dan menimbulkan bahaya bagi negara. Aleksander mengumpulkan pasukan, memimpinnya melawan para pemberontak, dan dengan tindakan cepat mengalahkan Maedi, merebut benteng mereka, dan menamainya Alexandropolis.
Aleksander menjadi raja Makedonia pada tahun 336 SM ketika ayahnya dibunuh. Sebuah pertemuan diadakan untuk kota-kota Yunani menjadikannya strategos (Jenderal atau komandan tertinggi). Dia menggunakan wewenang ini untuk melancarkan rencana ekspansi militer ayahnya. Pada tahun 334 SM, ia menyerbu Asia Kecil yang dikuasai Persia. Dia memulai serangkaian kampanye yang berlangsung selama sepuluh tahun. Aleksander mematahkan kekuatan Persia dalam serangkaian pertempuran yang menentukan, terutama pertempuran Issus dan Gaugamela. Dia menggulingkan Raja Persia Darius III dan menaklukkan seluruh Kekaisaran Persia. Pada saat itu, kekaisaran Aleksander membentang dari Laut Adriatik ke Sungai Indus.
Dia menyerang India pada tahun 326 SM, dan mengalahkan Raja Porus, yang memerintah sebuah wilayah di Punjab. Setelah itu mereka menjadi sekutu. India pada waktu itu terbagi menjadi ratusan kerajaan. Tentara menolak untuk menyeberangi Indus dan melawan raja-raja di sisi lain, sehingga Aleksander memimpin mereka keluar dari India.
Aleksander meninggal di Babilonia pada tahun 323 SM, karena penyebab yang tidak diketahui. Racun, pembunuhan, atau demam setelah pertempuran, semuanya telah diduga. Pada saat kematiannya, dia sedang merencanakan serangkaian kampanye yang akan dimulai dengan invasi ke Arab. Pada tahun-tahun setelah kematiannya, serangkaian perang saudara merobek kerajaannya. Beberapa negara bagian kemudian diperintah oleh Diadochi, jenderal-jenderal Aleksander yang masih hidup dan ahli warisnya. Mereka bertempur dan menaklukkan satu sama lain. Bagian terbesar yang masih hidup adalah Kekaisaran Seleukus.
Warisan Aleksander mencakup penyebaran budaya gagasan dan bahasa Makedonia. Dia mendirikan sekitar dua puluh kota yang dinamai menurut namanya, terutama Alexandria di Mesir. Pemukiman Aleksander dari koloni Makedonia menghasilkan peradaban Helenistik baru. Tanda-tanda ini bisa dilihat di Kekaisaran Bizantium pada pertengahan abad ke-15 Masehi. Ada penutur bahasa Makedonia di Anatolia tengah dan timur jauh sampai tahun 1920-an.
Ketika Alexander meninggal, usianya baru 32 tahun.
