Isabella dari Kastilia (22 April 1451 - 26 November 1504) adalah seorang ratu Kastilia dan León. Ia adalah putri dari Yohanes II dari Kastilia dan istri keduanya Isabel dari Portugal.
Saudaranya, Enrique IV, yang merupakan raja Kastilia, ingin menikahkannya. Dia ingin menikahi seseorang dari Portugal untuk membuat sekutu politik. Dia diam-diam menikahi Ferdinand II dari Aragon pada tahun 1469, dan memiliki lima orang anak dengannya. Yang termuda adalah Catherine dari Aragon, yang menikah dengan Henry VIII dari Inggris pada tahun 1509. Isabella adalah nenek dari Carlos I dari Spanyol (Charles V, Kaisar Romawi Suci).
Ketika saudara laki-laki Isabella meninggal, dia seharusnya menjadi ratu yang baru. Putri saudaranya Enriques, Juana, ingin menjadi ratu sebagai gantinya. Setelah perang, Isabella menjadi ratu. Pada saat yang sama, suami Isabella, Ferdinand, menjadi raja Aragon. Mereka menyatukan tanah Kastilia dan Aragon menjadi Spanyol saat ini. Isabella membantu membayar empat perjalanan Christopher Columbus untuk menemukan benua Amerika. Pada masanya, Amerika disebut "Dunia Baru". Dia menandatangani gencatan senjata pada tahun 1492 yang menjadikan Spanyol sebagai negara Kristen. Setelah dia meninggal, putrinya Joanna dari Castile menjadi ratu.
