St John Ambulance adalah sekelompok organisasi yang menyediakan pertolongan pertama dan pengobatan darurat. Mereka bekerja di lebih dari 40 negara, sebagian besar di Persemakmuran Bangsa-Bangsa.

Peran St John Ambulance bervariasi. Misalnya, di beberapa bagian Australia, St John Ambulance adalah layanan ambulans utama. Di sebagian besar tempat, St John Ambulance sebagian besar adalah sukarelawan dan peran mereka adalah memberikan pertolongan pertama pada acara-acara lokal (misalnya pertandingan olahraga, pameran lokal, balapan, dll.) dan pelatihan pertolongan pertama kepada masyarakat.

St John Ambulance dijalankan oleh pendirinya, Ordo Yang Mulia Santo Yohanes. Ordo ini adalah keturunan dari Ksatria Hospitaller dari Abad Pertengahan. Mereka mendirikan cabang pertama St John Ambulance di Inggris pada abad ke-19. Pada tahun 1877, Asosiasi St John Ambulance didirikan untuk mengajarkan keterampilan pertolongan pertama. Pada tahun 1887, Brigade St John Ambulance didirikan untuk memberikan pertolongan pertama pada acara-acara lokal. Keduanya sejak itu telah digabungkan ke dalam cabang Inggris St John Ambulance.

Petugas pertolongan pertama untuk St John Ambulance sering terlihat mengenakan seragam. Mereka awalnya memiliki pangkat tentara, meskipun sekarang banyak yang menggunakan pangkat non-militer sebagai gantinya. Beberapa cabang memiliki kadet, untuk remaja dan anak-anak yang lebih tua.

Semua cabang St John Ambulance menggunakan Salib Malta delapan titik sebagai logo mereka. Simbol ini muncul pada sejumlah organisasi keturunan Ksatria Hospitaller. Ordo Korps Ambulans Malta di Irlandia adalah contohnya. Organisasi serupa lainnya termasuk Palang Merah dan Bulan Sabit Merah (gerakan di seluruh dunia) dan Pertolongan Pertama St Andrew di Skotlandia.